<기기소개>
- Q-Exactive HF-X (Thermo)
- NANO LC (Thermo)
- Maximum Resolution : ≥240,000 (FWHM) for ≥1Hz scan rate
- Mass accuracy : ≤3 ppm external / ≤1 ppm internal
- MS/MS Sensitivity: 100 fg Reserpine @ ≥150:1
- Scan Rate : Up to 40 Hz
- Intra-Scan Dynamic Range: ≥ 5,000:1
- Multiplex-MS : up to 10 precursors/scan
- Polarity Switching: ≥ 60,000 Resolution @ ≤ 1sec with single injection
- Nano-ESI: Max. Pressure: ≥ 1,000bar / Max. Column length: 750mm
- 분석용 / 공동활용서비스
- 고분해능 액체크로마토 질량분석기
- 높은 분해능으로 질량을 구분하여 미지물질의 정보를 확인할 수 있어 단백질체학, 미지시료성분 ID 및 정량분석, 대사체학, 약리학 등 분석에 사용되는 분석기기
- Compound Discoverer, Proteome Discoverer 소프트웨어 설치되어 Library Search 가능
Protein Digestion : In-solution
- 시료 준비: 샘플, 500mM Dithiotreitol (in 50mM Ammoniumbicarbonate), 500mM Idoacetamide(in 50mM ABC), Trypsin, 50mM ABC, 8M Urea
- 8M Urea로 시료 Lysis 시킨 뒤, 500mM DTT를 샘플 volume 에 맞춰 25mM만큼 넣어줌 (샘플 volume의 1/20, 단백질 내 이황화결합 끊어줌) >> 60도에서 30~40분
- 500mM IAA를 샘플 volume에 맞춰 25mM만큼 넣어줌 (샘플 volume의 1/20, Alkylation, 이황화 결합의 재생방지) >> 실온, 어둡게 하여 30분
- 샘플 내 8M urea를 1M로 희석 할 정도의 Trypsin in 50mM ABC을 만들어 넣어줌 (Trypsin은 Bradford로 측정한 단백질의 농도에 비례해서 1/20~1/50정도로, Trypsin은 50mM ABC(pH ~8)에 녹여 사용하는데, 이때 volume을 urea 희석을 위해 샘플의 7~8배 정도로 만든다.)
- 37도에서 16~18시간 incubation
- C18 spin column desalting
- 정제된 추출물을 speed vac 이용하여 모두 날리고 solvent A(0.1% Formic acid) 15~20uL로 회수
-> 0.02 ~ 30 ug 단백질 분석가능, 1ug/uL 농도 되게끔 회수
또는 전처리 키트 사용 (EasyPep Mini MS Sample Prep Kit 등)
장비에 대한 요금 정보를 보여주는 테이블
구분 |
실험/옵션명 |
적용일 |
기준 |
교내교수 |
교내학생 |
교외교수 |
교외학생 |
업체(연구소) |
실험 (분석의뢰(시료)) |
NanoLC+Orbitrap분석(단백질_전용, 3반복) |
2024-06-03 |
1개 |
450,000원 |
450,000원 |
600,000원 |
600,000원 |
600,000원 |
실험 (분석의뢰(시료)) |
NanoLC+Orbitrap분석(단백질_전용, 시료1개단위) |
2024-06-03 |
1개 |
150,000원 |
150,000원 |
200,000원 |
200,000원 |
200,000원 |
옵션 |
Proteome Discoverer소프트웨어 서치n |
2024-11-04 |
1회 |
100,000원 |
100,000원 |
100,000원 |
100,000원 |
100,000원 |
옵션 |
전처리 비용(바이알, 캡, 피펫팁 등)n |
2024-11-04 |
1개 |
50,000원 |
50,000원 |
50,000원 |
50,000원 |
50,000원 |